【dpph法】在现代食品、化妆品及医药领域，活性物质的抗氧化性能成为研究的重点之一。而“DPPH法”作为一种常用的自由基清除能力检测方法，被广泛应用于评估各种天然或合成化合物的抗氧化活性。本文将围绕DPPH法的基本原理、操作流程及其应用进行详细介绍。

一、什么是DPPH法？

DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一种稳定的有机自由基，因其在可见光区具有明显的吸收峰（通常在517 nm处），常被用作自由基的指示剂。DPPH法的核心原理是通过观察DPPH自由基在加入抗氧化剂后的吸光度变化，来判断该物质的自由基清除能力。

二、DPPH法的原理

当DPPH溶液与抗氧化剂接触时，抗氧化剂会与DPPH自由基发生反应，将其还原为无色的中性分子，从而导致溶液颜色由深紫色变为浅黄色。这种颜色变化可以通过分光光度计测定吸光度的变化，进而计算出抗氧化剂的清除率。

具体公式如下：

$$

\text{清除率} = \left( \frac{A_0 - A}{A_0} \right) \times 100\%

$$

其中，$A_0$ 为未加抗氧化剂时的吸光度，$A$ 为加入抗氧化剂后的吸光度。

三、DPPH法的操作步骤

1. 配制DPPH溶液：通常使用乙醇或甲醇作为溶剂，浓度约为0.1 mmol/L。

2. 样品准备：将待测样品溶解于适当溶剂中，制成不同浓度的溶液。

3. 混合反应：将一定体积的DPPH溶液与样品溶液按比例混合，静置一段时间（一般为30分钟）。

4. 测定吸光度：使用分光光度计在517 nm波长下测定混合液的吸光度。

5. 计算清除率：根据上述公式计算不同浓度下的清除率。

四、DPPH法的优点与局限性

优点：

- 操作简便，设备要求低；

- 结果直观，易于定量分析；

- 适用于多种类型的抗氧化剂，包括多酚、黄酮类等。

局限性：

- DPPH自由基属于脂溶性自由基，不能完全模拟体内环境中的自由基类型；

- 受到样品溶解度和干扰物质的影响较大；

- 对某些水溶性较强的抗氧化剂可能灵敏度较低。

五、DPPH法的应用

DPPH法广泛应用于以下领域：

- 食品科学：评估天然抗氧化剂如维生素C、茶多酚等的抗氧化能力；

- 化妆品行业：检测护肤品中添加的抗氧化成分；

- 药物研发：筛选具有潜在抗氧化作用的药物分子。

六、结语

尽管DPPH法存在一定的局限性，但其简单、快速、成本低的特点使其成为实验室中不可或缺的抗氧化能力检测手段。随着科学技术的发展，未来可能会有更精确、更贴近生理条件的检测方法出现，但在当前阶段，DPPH法仍然是评价抗氧化性能的重要工具之一。